96 ensayo: kits de ensayo ELISA para la detección de kanamicina de alta reproductibilidad

Kit de ensayo ELISA para la canamicina

Descripción del producto

En el caso de los^{- ¿ Qué?}El kit de pruebas ELISA de kanamicina es un ensayo inmunológico enzimático competitivo para el análisis cuantitativo de kanamicina en carne/hígado/riñón, lisato celular, orina, suero y leche.

Las características únicas del kit son:

• Métodos de extracción de alta recuperación (> 80%), rápidos (10-40 minutos) y rentables.

• El límite de detección es de 0,2 ng/g.

• Alta reproducibilidad.

• Un análisis rápido de ELISA (menos de 1 hora independientemente del número de muestras).

Resumen del procedimiento

El método se basa en un ensayo ELISA colorimétrico competitivo.se añade a los pozos de incubación la muestra y el anticuerpo de kanamicina (anticuerpo #1) y el HRP-conjugado (anticuerpo #2)Si el residuo de kanamicina está presente en la muestra, competirá con la kanamicina en los pozos de la placa para el anticuerpo de kanamicina, el anticuerpo secundario, etiquetado con una enzima peroxidasa,se dirige al anticuerpo primario que se compleja con el fármaco recubierto en los pozos de la placaLa intensidad de color resultante, después de la adición del sustrato HRP (TMB), tiene una relación inversa con la concentración de residuos de kanamicina en la muestra.

Contenido del kit, almacenamiento y vida útil

En el caso de los^{- ¿ Qué?}El kit de ensayo ELISA de kanamicina tiene capacidad para 96 determinaciones o ensayos de 42 muestras en duplicado (suponiendo 12 pozos para estándares).Devuelva todos los microcuencos no utilizados a la bolsa de papel y vuelva a sellarlos con el desecante que figura en el embalaje original.. Conservar el kit a 2-8°C. El tiempo de conservación es de 12 meses cuando el kit se almacena correctamente.

Si no planea utilizar el kit durante más de 1 mes, guarde Kanamicina Estándar, el Anticorpo de Kanamicina #1 y el Anticorpo HRP-Conjugado #2 a -20°C o en congelador.

Sensitividad (límite de detección)

Especificidad (reactividad cruzada)

Materiales necesarios no incluidos en el kit

• Lector de placas de microtiter (450 nm)

• El equipo de mezcla de tejidos (por ejemplo, Omni Tissue Master Homogenizer)

• El dispositivo de mezcla de vórtices (por ejemplo, el dispositivo de mezcla de vórtices Genie de VWR)

• 10, 20, 100 y 1000L pipetas

• La pipeta multicanal: 50-300 L (opcional)

Advertencias y precauciones

• Los estándares contienen kanamicina.
• No utilice el kit después de la fecha de caducidad.
• No se mezclen reactivos de diferentes kits o lotes, excepto para componentes con el mismo número de pieza dentro de sus fechas de caducidad.
• Trate de mantener una temperatura de laboratorio de 20° 25° C (68° 77° F). Evite ejecutar ensayos bajo o cerca de las aberturas de aire, ya que esto puede causar enfriamiento, calentamiento y/o evaporación excesivos.no ejecutar ensayos a la luz solar directa, ya que esto puede causar calor excesivo y evaporación.Durante la incubación, se deben evitar los bancos fríos colocando varias capas de toalla de papel o algún otro material aislante debajo de las placas de ensayo..
• Asegúrese de utilizar sólo agua destilada o desionizada, ya que la calidad del agua es muy importante.
• Cuando las muestras o los reactivos se coloquen por pipeta en una placa de microtiter vacía, coloque las puntas de la pipeta en la esquina inferior del pozo, haciendo contacto con el plástico.
• Las incubadoras de las placas de ensayo deben ser cronometradas con la mayor precisión posible. Sea coherente al agregar estándares a la placa de ensayo. Agregue sus estándares primero y luego sus muestras.
• Añadir estándares a la placa solo en el orden de baja concentración a alta concentración, ya que esto minimizará el riesgo de comprometer la curva estándar.
• Siempre refrigerar las placas en bolsas selladas con un desecante para mantener su estabilidad.Prevenir la formación de condensación en las placas, dejándolas equilibrarse a temperatura ambiente (20°C / 68°F) mientras están en el embalaje.

Asegúrese de que las muestras se almacenan correctamente. En general, las muestras deben refrigerarse a 2-4 °C durante no más de 1-2 días. Congele las muestras a un mínimo de -20 °C si necesitan almacenarse durante un período más largo.Las muestras congeladas se pueden descongelar a temperatura ambiente (20 25 ° C / 68 77 ° F) o en refrigerador antes de su uso..

• Preparación de 1 × diluyente de la muestra:Mezclar 1 volumen de 10 × diluyente de muestra con 9 volúmenes de agua destilada.
• Preparación de 1 ×Puffer de extracción de muestras: Mezclar 1 volumen de tampón de 10 × Ext. de muestra con 9 volúmenes de agua destilada.

Lisato celular

• Tomar 100 litros de lisato celular, añadir 900 litros de amortiguador diluyente de 1 × muestra, mezclar bien.

• Centrifugar durante 5 minutos a 4000 x g.

• Se tomarán 50 litros de supernatante por pozo para el ensayo.

Nota: Factor de dilución: 10.

Camarones/pez/carne/hígado/riñón

• A 1,0 g de la muestra homogeneizada se añaden 4,0 ml de tampón de 1 × Ext. de muestra,

• Vortex la muestra durante 1 minuto con el mezclador de vórtices.

• Centrifugar la muestra durante 5 minutos a 4.000 x g.

• Transfiera cuidadosamente 200 litros de la capa superior a un nuevo tubo.,añadir 1.375 ml de diluyente de muestra 1X y 25 uL de amortiguador de equilibrio de muestra, vórtice durante 30 segundos.

• Para el ensayo se utilizarán 50 uL por pozo.

Nota: Factor de dilución: 40.

Orina y suero

• Tomar 50 uL de muestra de orina o suero, añadir 1,2 ml de diluyente de 1 x muestra, mezclar bien.

• Centrifugar durante 5 minutos a 4.000 g.

• Se tomarán 50 uL de supernatante por pozo para el ensayo.

Nota: Factor de dilución: 25.

Leche

• Se añaden 100 uL de muestra de leche a un tubo de centrifugadora, se añaden 900 uL de diluyente de 1x de muestra.
• Vórtice vigorosamente durante 30 segundos.
• Centrifugar a 4.000 x g durante 10 minutos.
• Para el ensayo se utilizarán 50 litros de la muestra supernatante.

Nota: Factor de dilución:10

Protocolo del kit de pruebas de KANAMYCIN ELISA

Preparación del reactivo

IMPORTANTE: Todos los reactivos deben alcanzar la temperatura ambiente antes de su uso. (1 20 ¢ 25¿ Qué pasa?C / 68 ¢ 77¿ Qué pasa?F); Asegúrese de leer la sección “Advertencias y precauciones” enpágina3.Las soluciones deben prepararse justo antes del ensayo ELISA. Todos los reactivos deben mezclarse invirtiendo suavemente o girando antes de su uso. Preparar los volúmenes necesarios para el número de pozos que se ejecutan.No devuelva los reactivos a los tubos/botellas originalesEl uso de depósitos desechables al manipular los reactivos puede minimizar el riesgo de contaminación y se recomienda.

• Preparación de 1X solución de lavado

Mezclar 1 volumen de la solución de lavado 20X con 19 volúmenes de agua destilada.

Protocolo de ensayo ELISA

Etiquetar las tiras individuales que se utilizarán y los reactivos aliquotas como se muestra en el siguiente ejemplo:

• Añadir 50 IU de cada uno de los estandares de kanamicina en duplicado en pozos diferentes (Añadir estandares a la placa sólo en el orden de baja concentración a alta concentración).

• Añadir 50 litros de cada muestra en duplicado en pozos de muestreo diferentes.

• Añadir 50 I.L. de HRP-Conjugated Ab#2 a cada pozo y 50 I.L. de Anticorpos de Kanamicina #1 a cada pozo. Mezclar bien moviendo suavemente la placa manualmente durante 30 segundos.

• Incubar el plato durante 30 minutos a temperatura ambiente (20°C / 68°F). (Evite la luz solar directa y los bancos fríos durante la incubación.

• Lávese el plato 4 veces con 250 I.L. de 1 X solución de lavado.No deje que la placa se seque al aire entre las etapas de trabajo).

• Añadir 100L de sustrato de TMB. Tiempo de la reacción inmediatamente después de añadir el sustrato. Mezclar la solución sacudiendo suavemente la placa manualmente durante 30 segundos mientras se incuba.No vuelva a colocar ningún sustrato en el recipiente original para evitar cualquier posible contaminación.Se recomienda cubrir la placa de microtiter durante la incubación).

• Después de incubación durante 15 minutos a temperatura ambiente (20 ¢ 25¿ Qué pasa?C / 68 ¢ 77¿ Qué pasa?F: el precio), añadir 100 L de Stop Buffer para detener la reacción enzimática.

• Leer la placa tan pronto como sea posible después de añadir el tampón de parada en un lector de placa con longitud de onda de 450 nm (Antes de leer,utilizar una toalla sin peludas en la parte inferior de la placa para garantizar que la humedad o las huellas dactilares no interfieran con las lecturas).

Cálculos de las concentraciones de kanamicina

Se puede construir una curva estándar trazando la absorbancia relativa media (%) obtenida de cada estándar de referencia con su concentración en ng/mL en una curva logarítmica.

Absorción relativa (%) =norma de absorción ceroo muestra x 100

Se utilizarán los valores medios de absorbancia relativa de cada muestra para determinar la concentración correspondiente del fármaco en ensayo en ng/ml a partir de la curva estándar.

La siguiente figura es una curva estándar típica del cloramfenicol.