96 equipos de la prueba de la prueba ELISA para reproductibilidad de la detección de la kanamicina la alta

Kanamicina ELISA Test Kit

Descripción de producto

La kanamicina ELISA Test Kit del ^™ de REAGEN es un immunoensayo competitivo de la enzima para el análisis cuantitativo de la kanamicina en carne/hígado/riñón, lysate de la célula, orina, suero y leche.

Las características únicas del equipo son:

• Altos recuperación (el >80%), rápidas (10-40 minutos), y métodos rentables de la extracción.

• El límite de detección es 0,2 ng/g.

• Alta reproductibilidad.

• Un análisis rápido de ELISA (menos de 1 hora sin importar el número de muestras).

Descripción del procedimiento

El método se basa en un análisis colorimétrico competitivo de ELISA. La kanamicina-BSA ha estado cubierta en los pozos de la placa. Durante el análisis, la muestra y el anticuerpo de la kanamicina (anticuerpo #1) y HRP-conjugación (el anticuerpo HRP-conjugado #2) se añade a los pozos para la incubación. Si el residuo de la kanamicina está presente en la muestra, competirá con la kanamicina en los pozos de la placa para el anticuerpo de la kanamicina, el anticuerpo secundario, marcado con etiqueta con una enzima de la peroxidasa, las blancos el anticuerpo primario que es complexed a la droga cubierta en los pozos de la placa. La intensidad resultante del color, después de la adición del substrato de HRP (TMB), tiene una relación inversa con la concentración del residuo de la kanamicina en la muestra.

Kit Contents, almacenamiento y vida útil

La kanamicina ELISA Test Kit del ^™ de REAGEN tiene la capacidad para 96 determinaciones o probar de 42 muestras dos veces (si se asume que 12 pozos para los estándares). Vuelva cualquier microwells inusitado al bolso de la hoja y reséllelo con el desecante proporcionado en el paquete original. Almacene el equipo en 2-8°C *. La vida útil es 12 meses en que el equipo se almacena correctamente.

Si usted no está planeando utilizar el equipo para más de 1 mes, la acción estándar de la kanamicina de la tienda, anticuerpo #1and de la kanamicina HRP-conjugó el anticuerpo #2 en -20°C o en un congelador.

Sensibilidad (límite de detección)

Especificidad (reactividad cruzada)

Materiales requeridos no proporcionados el equipo

• Lector de la placa de microtítulo (450 nanómetro)

• Mezclador del tejido (e.g. homogeneizador del amo del tejido de Omni)

• Mezclador del vórtice (e.g. mezclador de Genie Vortex de VWR)

• pipetas 10, 20, 100 y 1000 de la UL

• Pipeta de varios canales: 50-300 UL (opcional)

Advertencias y precauciones

• Los estándares contienen la kanamicina. Manija con cuidado particular.
• No utilice el equipo más allá de la fecha de caducidad.
• No entremezcle los reactivo de diversos equipos o las porciones a excepción de componentes con el mismo número de parte dentro de sus fechas de caducidad. LOS ANTICUERPOS Y LAS PLACAS SON KIT-AND LOT-SPECIFIC.
• Intente mantener una temperatura del laboratorio de 20°-25°C (68°-77°F). El funcionamiento Avoid prueba bajo o cerca de salidas de aire, pues éste puede causar el enfriamiento, la calefacción y/o la evaporación excesivos. También, no funcione con los análisis en luz del sol directa, como esto puede causar calor excesivo y la evaporación. Los tops fríos del banco deben ser evitados colocando varias capas de toalla de papel o de un poco de otro material de aislamiento debajo de las placas del análisis durante la incubación.
• Asegúrese de que usted con esté destilando solamente o agua desionizada puesto que la calidad del agua es muy importante.
• Al medir con una pipeta muestras o los reactivo en una placa de microtítulo vacía, ponga las extremidades de la pipeta en la esquina más baja del pozo, haciendo el contacto con el plástico.
• Las incubaciones de las placas del análisis se deben medir el tiempo tan exacto como sea posible. Sea constante al añadir estándares a la placa del análisis. Primero y después añada sus estándares sus muestras.
• Añada los estándares para platear solamente en el orden de la concentración baja a la alta concentración pues esto minimizará el riesgo de comprometer la curva estándar.
• Refrigere siempre las placas en bolsos sellados con un desecante para mantener estabilidad. Evite la condensación forme en las placas permitiendo que equilibren a la temperatura ambiente (20 – 25°C/68 – 77°F) mientras que en el empaquetado.

Esté seguro que las muestras están almacenadas correctamente. En general, las muestras se deben refrigerar en 2-4°C por no más que 1-2 días. Muestras del helada a un mínimo de -20°C si necesitan ser almacenadas por un período más largo. Las muestras congeladas se pueden deshelar en los temps del sitio (20 – 25°C/68 – 77°F) o en un refrigerador antes de usar.

• Preparación del diluyente 1×Sample: Mezcla 1 volumen del diluyente 10×Sample con 9 volúmenes de agua destilada.
• Preparación del almacenador intermediario exterior 1×Sample: Mezcla 1 volumen del almacenador intermediario exterior 10×Sample con 9 volúmenes de agua destilada.

Célula Lysate

• Tome UL 100 del lysate de la célula, añada UL 900 del almacenador intermediario del diluyente 1×Sample, mézclese bien.

• Centrifugadora por 5 minutos en 4000 x G.

• Tome UL 50 del sobrenadante por el pozo para el análisis.

Nota: Factor del dilución: 10.

Carne del camarón/de pescados/hígado/riñón

• A 1,0 g de la muestra homogeneizada, añada 4.0mL del almacenador intermediario exterior 1×Sample,

• Vórtice la muestra por los minutos 1 con el mezclador del vórtice.

• Centrifugue la muestra por 5 minutos en 4.000 x G.

• Transfiera cuidadosamente 200uL de la capa superior a un nuevo tubo, añada 1.375mldediluyentede lamuestra1Xy25uLdelalmacenador intermediariode labalanzade lamuestra, vórticepor30segundos.

• Utilice 50uL por el pozo para el análisis.

Nota: Factor del dilución: 40.

Orina/suero

• Tome 50uL de la orina o la muestra del suero, añade 1,2 ml de diluyente de la muestra 1X, se mezcla bien.

• Centrifugadora por 5 minutos en 4.000 x G.

• Tome 50uL del sobrenadante por el pozo para el análisis.

Nota: Factor del dilución: 25.

Leche

• Añada 100uL de la muestra de la leche en un tubo de centrífuga, añada 900uL del diluyente de la muestra 1X.
• Vórtice vigoroso por 30 segundos.
• Centrifugadora en 4.000 x g por 10 minutos.
• Utilice 50uL de la muestra flotante para el análisis.

Nota: Factor del dilución: 10

PROTOCOLO DEL EQUIPO DE LA PRUEBA DE LA KANAMICINA ELISA

Preparación el reactivo

IMPORTANTE: Todos los reactivo se deben traer hasta temperatura ambiente antes de usar (1 – 2 horas en 20 – 25°C/68 – el°F) 77; Asegúrese de que usted sección leída de las “advertencias y de las precauciones” en soluciones de la página 3. sea preparado apenas antes de prueba de ELISA. Todos los reactivo deben ser mezclados suavemente invirtiendo o remolinando antes de uso. Prepare los volúmenes que son necesarios para el número de pozos que son corridos. No vuelva los reactivo a los tubos/a las botellas comunes originales. Usando depósitos disponibles cuando la manipulación de los reactivo puede minimizar el riesgo de contaminación y se recomienda.

• Preparación de la solución del lavado 1X

Mezcla 1 volumen de la solución del lavado 20X con 19 volúmenes de agua destilada.

ELISA Testing Protocol

Etiquete las tiras individuales que serán utilizados y los reactivo de la parte alícuota como el ejemplo siguiente:

• Añada UL 50 de los estándares de cada kanamicina dos veces en diversos pozos (añada los estándares para platear solamente en el orden de la concentración baja a la alta concentración).

• Añada UL 50 de cada muestra dos veces en diversos pozos de la muestra.

• Añada UL 50 UL HRP-Conjugar Ab#2 a cada pozo y 50 del anticuerpo #1 de la kanamicina a cada pozo. Mézclese bien suavemente oscilando la placa manualmente para 30s.

• Incube la placa por 30 minutos en la temperatura ambiente (20 – 25°C/68 – 77°F). (Evite la luz del sol directa y los tops fríos del banco durante la incubación. Recubrimiento de la placa de microtítulo mientras que se recomienda la incubación).

• Lave la placa 4 veces con UL 250 de la solución del lavado 1X. Después del lavado pasado, invierta la placa y golpee ligeramente suavemente el seco de placa en las toallas de papel (realice el paso siguiente inmediatamente después de lavados de la placa. No permita que la placa ventile seco entre los pasos de funcionamiento).

• Añada UL 100 del substrato de TMB. Mida el tiempo de la reacción inmediatamente después de añadir el substrato. Mezcle la solución suavemente oscilando la placa manualmente para 30s mientras que incuba (no ponga ningún substrato de nuevo al envase original para evitar ninguna contaminación potencial. Cualquier solución del substrato que exhibe la coloración es indicativa del deterioro y debe ser desechada. Recubrimiento de la placa de microtítulo mientras que se recomienda la incubación).

• Después de incubar por 15 minutos en la temperatura ambiente (el°F) 20 – 25°C/68 – 77, añade UL 100 del almacenador intermediario de la parada para parar la reacción enzimática.

• Lea la placa que sigue cuanto antes la adición de almacenador intermediario de la parada en un lector de la placa con la longitud de onda de 450 nanómetro (antes de la lectura, utilice un trapo sin pelusa en la parte inferior de la placa para asegurarse que ninguna humedad o huellas dactilares interfieren con las lecturas).

Cálculos de la concentración de la kanamicina

Una curva estándar puede ser construida trazando la absorción relativa mala (%) obtuvo de cada estándar de referencia contra su concentración en ng/mL en una curva logarítmica.

Absorción relativa (%) = estándar cero o muestra x 100 de la absorción

Utilice los valores relativos malos de la absorción para cada muestra para determinar la concentración correspondiente de la droga probada en ng/mL de la curva estándar.

La figura siguiente es una curva estándar del cloranfenicol típico.